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Servicios

PLACEMA es una plataforma tecnológica que ofrece servicios estandarizados de producción de células madre reprogramadas humanas y su posterior diferenciación a células con funciones específicas. Sus servicios cubren las demandas del sector académico, de la industria farmacéutica y de la clínica.

PLACEMA se ha diseñado para brindar servicios de alto contenido tecnológico siguiendo normativas internacionales de Buenas Prácticas de Manufactura. La calidad del servicio se basa en esta normativa y en la experiencia única en Argentina de la Asociación ad hoc formada para este fin. Así mismo, PLACEMA fue pensada para ser sostenible en el tiempo y permitir el acceso de la comunidad científica, el sector productivo y a la clínica, a sus servicios.

Controles de Calidad

PLACEMA genera sus productos celulares bajo estrictos controles de calidad. A continuación se describen dichos controles y se muestran resultados representativos. Este tipo de informe acompaña a los productos celulares que entrega PLACEMA:

  1. Cariotipo
  2. Caracterización de pluripotencia I
  3. Caracterización de pluripotencia II
  4. Caracterización de pluripotencia III
  5. Caracterización de pluripotencia IV
  6. Caracterización de pluripotencia V
  7. Viabilidad al descongelar
  8. Micoplasma
  9. Esterilidad de los clones de CMR congelados

Test 1: Cariotipo

Descripción

Se analiza el cariotipo a las células parentales y de las CMR por medio de bandeo G.


Especificación para la liberación de las CMR

Cariotipo de las CMR acorde a la célula parental.


Test 2: Caracterización de pluripotencia I

Descripción

RT-PCR de RNA de CMR para detectar la expresión de genes de pluripotencia: SOX2 - OCT4 - HGDF3 - Rex 1 - pH34 - Nanog


Resultados

Expresión de genes de pluripotencia.
En la figura:
Calles CMR 1 a 4: colonias de CMR independientes
Calles PARENTAL: células de partida para la reprogramación
Calles No RT: control interno negativo


Especificación para la liberación de las CMR

Amplificación positiva para los genes de pluripotencia y para gen housekeeping y amplificación negativa para las muestras parentales y los controles No-RT.

Test 2: Resultado negativo para las parentales, negativo para No-RT, positivo para los genes de pluripotencia y para gen housekeeping (cDNA).

Test 2: Resultado negativo para las parentales, negativo para No-RT, positivo para los genes de pluripotencia y para gen housekeeping (cDNA).

Test 3: Caracterización de pluripotencia II

Descripción

Inmunocitoquímica de CMR contra marcadores de pluripotencia: Nanog - SSEA4 - OCT-4 - Tra 1-81


Resultados

Inmunocitoquímica de CMR.
En la figura:
A) OCT-4
B) Nanog
C) SSEA-4
D) Tra 1-81


Especificación para la liberación de las CMR

Detección positiva por inmunocitoquímica de los marcadores de pluripotencia.

Test 3: Resultado positivo para todos los marcadores testados.

Test 3: Resultado positivo para todos los marcadores testados.

Test 4: Caracterización de pluripotencia III

Descripción

Generación de cuerpos embrioides por diferenciación espontánea a los tres linajes embrionarios, en ausencia de factores que promueven el estado de pluripotencia.


Resultados

En el panel superior de la figura se observan fotografías de campo claro de la obtención de colonias. En el panel inferior, fotografías de la formación de cuerpos embrioides en distintos días del protocolo.
Video evidenciando formación espontánea de cuerpos latidores.


Especificación para la liberación de las CMR

Formación de cuerpos embrioides y tinciones específicas de los 3 linajes positivas.

Test 4: Formación de cuerpos embrioides y tinciones específicas de linaje.

Test 4: Formación de cuerpos embrioides y tinciones específicas de linaje.

Test 4: Video evidenciando formación espontánea de cuerpos latidores.

Test 5: Caracterización de pluripotencia IV

Descripción

qRT-PCR de genes específicos de los 3 linajes en cuerpos embrioides:
Endodermo: AFP y CXCR4
Mesodermo: Brachyury y PECAM1
Ectodermo: MAP2 y PAX6


Resultados

qRT- PCR para la detección de genes específicos de cada linaje:
Tabla 1: Datos de cambios de expresión del día 4 post-diferenciación respecto del día 0
Tabla 2: Estadística de los datos de la Tabla 1 (t-test de una cola).


Especificación para la liberación de las CMR

Disminución de la expresión de OCT 4 (marcador de pluripotencia) y aumento de la expresión de los distintos marcadores de diferenciación a cada linaje.

Test 5: Resultado negativo para Oct-4 y positivo para los otros marcadores.

Test 5: Resultado negativo para Oct-4 y positivo para los otros marcadores.

Test 6: Caracterización de pluripotencia V

Descripción

Inmunocitoquímica de cuerpos embrioides contra marcadores correspondientes a los 3 linajes y analizadas en microscopio de fluorescencia. Ectodermo: DCX y BetaIII Tubulina
Mesodermo: Desmina y Troponina
Endodermo: Gata 4 y AFP


Resultados

Inmunocitoquímica para detectar marcadores específicos de los 3 linajes en cuerpos embrioides:
En la figura
A) Dapi
B) DCX
C) BetaIII Tubulina
D) Dapi
E) AFP
F) Gata 4
G) DAPI
H) Troponina
I) Desmina


Especificación para la liberación de las CMR

Tinción positiva para los distintos marcadores de diferenciación a cada linaje.

Test 6: Resultado positivo para todos los marcadores testados.

Test 6: Resultado positivo para todos los marcadores testados.

Test 7: Viabilidad al descongelar

Descripción

Técnica de conteo de células descongeladas coloreadas con tinción vital y formación de colonias en cultivo.


Especificación para la liberación de las CMR

Recuento de células viables al descongelar mayor a 70%. Crecimiento normal de colonias al descongelar.


Test 8: Micoplasma

Descripción

PCR de DNA genómico de CMR para detección de contaminación por micoplasmas.


Resultados

Panel superior: PCR Housekeeping (producto esperado: 164pb)
Calles 1 a 7: DNA clones reprogramados
Calles 8 a 12: DNA control micoplasmas (Curva sensibilidad: 50, 5, 0.5, 0.05, 0.005ng)
Calle 13: control negativo
M: marcador de peso molecular 100pb
Panel inferior: PCR Micoplasmas (producto esperado: 370 a 490pb)
Calles 1 a 7: DNA clones reprogramados
Calles 8 a 12: DNA control micoplasmas (Curva sensibilidad: 50, 5, 0.5, 0.05, 0.005ng)
Calle 13: control negativo
M: marcador de peso molecular 100pb


Especificación para la liberación de las CMR

amplificación negativa para micoplasmas en DNA de CMR y positiva en la curva control, amplificación positiva para el gen housekeeping.

Test 8: Ensayo negativo para micoplasma.

Test 8: Ensayo negativo para micoplasma.

Test 9: Esterilidad de los clones de CMR congelados

Descripción

Siembra de muestras del material criopreservado en medios de cultivo enriquecidos para crecimiento y cultivo de microorganismos aeróbicos.


Especificación para la liberación de las CMR

Ausencia de crecimiento de microorganismos.